cas：336185-20-7，F(xiàn)M 2-10 是一種親脂性苯乙烯染料類膜電位熒光探針，主要用于檢測(cè)細(xì)胞膜電位變化，尤其在神經(jīng)科學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中具有重要應(yīng)用價(jià)值。

化學(xué)本質(zhì)與基本性質(zhì)

• 化學(xué)名稱：N-(3-三乙銨丙基)-4-(4-(二乙氨基)苯乙烯基)吡啶二溴鹽

• 分子量：555.43 g/mol

• 外觀：固體

• 溶解性：

• 溶于水及大部分有機(jī)溶劑（如DMSO），便于配制工作液。

• 儲(chǔ)存條件：

• 短期：4℃密封避光保存（避免反復(fù)凍融）。

• 長(zhǎng)期：-20℃以下冰凍、干燥、避光保存（需分裝小份，減少解凍次數(shù)）。

結(jié)構(gòu)式：

熒光特性與工作原理

• 熒光行為：

• 水溶液中基本無(wú)熒光，插入細(xì)胞膜后發(fā)射強(qiáng)熒光（橙紅色至黃色）。

• 熒光強(qiáng)度隨細(xì)胞膜電位變化而改變，可實(shí)時(shí)反映電位動(dòng)態(tài)。

• 作用機(jī)制：

• 基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）技術(shù)，探針分子聚集在細(xì)胞膜上，受膜電位調(diào)控。

• 膜電位變化時(shí)，探針分子分布改變，導(dǎo)致熒光信號(hào)強(qiáng)度和分布變化。

核心應(yīng)用場(chǎng)景

1. 神經(jīng)科學(xué)研究：

• 神經(jīng)元放電監(jiān)測(cè)：通過熒光強(qiáng)度變化，實(shí)時(shí)追蹤神經(jīng)元電活動(dòng)，研究突觸傳遞過程。

• 囊泡循環(huán)研究：標(biāo)記主動(dòng)釋放神經(jīng)遞質(zhì)的神經(jīng)元，觀察突觸囊泡的動(dòng)態(tài)循環(huán)。

2. 心血管科學(xué)研究：

• 心肌細(xì)胞電活動(dòng)：檢測(cè)心肌細(xì)胞膜電位變化，研究心律失常等機(jī)制。

3. 免疫學(xué)研究：

• 免疫細(xì)胞活化：監(jiān)測(cè)免疫細(xì)胞膜電位變化，揭示細(xì)胞活化和遷移過程。

實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)

1. 工作液配制：

• 用DMSO配制儲(chǔ)備液（如5 mM），再用預(yù)熱緩沖液（如HBSS）稀釋至工作濃度（通常5-20 μM）。

2. 細(xì)胞標(biāo)記流程：

• 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，PBS洗滌后加入染料工作液，室溫孵育5-30分鐘，再洗滌重懸。

• 貼壁細(xì)胞：培養(yǎng)于蓋玻片上，移除培養(yǎng)基后加入染料工作液，孵育后洗滌成像。

3. 注意事項(xiàng)：

• 避光操作：熒光探針對(duì)光敏感，所有步驟需在避光條件下進(jìn)行。

• 避免反復(fù)凍融：分裝小份保存，減少解凍次數(shù)以維持探針穩(wěn)定性。

優(yōu)勢(shì)與局限性

• 優(yōu)勢(shì)：

• 高靈敏度：可檢測(cè)細(xì)胞膜電位微小變化（如毫伏級(jí)）。

• 快速響應(yīng)：熒光信號(hào)變化與膜電位變化同步，適合動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

• 穩(wěn)定性好：長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中性能穩(wěn)定，減少實(shí)驗(yàn)誤差。

• 局限性：

• 親脂性限制：雖能高效結(jié)合細(xì)胞膜，但可能影響某些膜蛋白功能。

• 光漂白風(fēng)險(xiǎn)：長(zhǎng)時(shí)間光照可能導(dǎo)致熒光信號(hào)衰減，需優(yōu)化成像條件。

cas：336185-20-7，F(xiàn)M 2-10 

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