NHS-5(6)Carboxyrhodamine（5(6)-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯，TAMRA-SE）是一種重要的熒光標記試劑，在生物化學和分子生物學領域具有廣泛的應用，具體用途如下：

1. 蛋白質標記與免疫檢測

• 蛋白質標記：NHS-5(6)Carboxyrhodamine可通過其NHS酯基團與蛋白質、抗體、肽等生物分子中的氨基（-NH?）發(fā)生共價偶聯反應，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。這種標記方式適用于多種蛋白質，如酶、抗體等，便于后續(xù)的熒光檢測和分析。

• 免疫分析：在免疫分析中，NHS-5(6)Carboxyrhodamine標記的抗體可用于Western Blot、免疫熒光染色等技術，用于分析和定量目標蛋白。其強熒光信號和良好的光穩(wěn)定性使得檢測結果更加準確可靠。

• 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：NHS-5(6)Carboxyrhodamine可偶聯到抗體上，通過熒光信號進行定量分析，提供比傳統(tǒng)顏色基質更高的靈敏度。

2. 核酸標記與檢測

• 寡核苷酸標記：NHS-5(6)Carboxyrhodamine可用于標記寡核苷酸、DNA/RNA探針，適用于熒光原位雜交（FISH）、自動DNA測序等實驗。其熒光特性使得核酸分子在檢測中更加容易被追蹤和定位。

• DNA/蛋白質標記與細胞染色：由于NHS-5(6)Carboxyrhodamine穩(wěn)定的熒光特性和對pH的不敏感性，它也適用于DNA/蛋白質的標記和細胞染色，有助于研究核酸與蛋白質的相互作用。

3. 細胞成像與追蹤

• 細胞內靶蛋白標記：NHS-5(6)Carboxyrhodamine可標記細胞內靶蛋白，實現高對比度熒光成像。其橙紅色熒光可避開生物組織自發(fā)熒光干擾，提高成像的清晰度。

• 細胞追蹤與定位：通過將NHS-5(6)Carboxyrhodamine偶聯到細胞表面分子或抗體上，研究人員可以定量分析細胞群體的免疫表型和分子表達，追蹤細胞在體內的分布、遷移和相互作用。

• 活體成像：結合近紅外染料，NHS-5(6)Carboxyrhodamine還可用于動物活體深層組織成像，為生物醫(yī)學研究提供有力工具。

4. 分子相互作用研究

• 熒光共振能量轉移（FRET）：NHS-5(6)Carboxyrhodamine可作為FRET技術中的受體染料，與FAM等供體染料配對，研究分子間相互作用。這種技術在蛋白質構象變化、DNA雜交等領域具有廣泛應用。

• 金屬離子與酶活性檢測：通過連接酶底物或離子螯合劑（如BAPTA），NHS-5(6)Carboxyrhodamine可構建熒光探針，檢測金屬離子（Ca2?、Mg2?）或酶活性變化。

5. 多肽標記與功能研究

• 多肽標記：NHS-5(6)Carboxyrhodamine可用于標記合成多肽，研究其結構與功能。這種標記方式有助于揭示多肽在生物體內的作用機制和信號傳導途徑。

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