Biotin-XX Tyramide Reagent 是一種用于酶介導(dǎo)的酪酰胺信號放大（TSA）的生物素衍生物，其核心特性、應(yīng)用領(lǐng)域及操作注意事項如下：

一、核心特性

1. 化學(xué)結(jié)構(gòu)

• 由酚基、酪酰胺核心和長鏈親水生物素（Biotin-XX）組成，分子式為 C??H??N?O?S，分子量 589.79。

• 長鏈結(jié)構(gòu)（XX）提供柔性空間，使生物素遠(yuǎn)離反應(yīng)位點，降低空間位阻對鏈霉親和素結(jié)合的影響。

2. 物理性質(zhì)

• 形態(tài)：淡黃色至淡棕色固體或粉末。

• 溶解性：易溶于有機(jī)溶劑（如DMSO、DMF）及部分水溶性緩沖液，溶解度≥59 mg/mL（DMSO）。

• 穩(wěn)定性：干燥狀態(tài)下穩(wěn)定，需低溫（-20℃）避光保存；水溶液或含過氧化氫體系中酚基易氧化，需新鮮配制或避光操作。

• pH適應(yīng)性：常用緩沖液范圍為pH 7–9，生物實驗條件下穩(wěn)定，不影響靶分子結(jié)構(gòu)。

3. 反應(yīng)活性

• 在過氧化物酶（如HRP）催化下，酚基氧化生成酚氧自由基，與靶分子（如蛋白質(zhì)或核酸）上的酪氨酸殘基共價結(jié)合，實現(xiàn)局部高密度標(biāo)記。

• 生物素基團(tuán)可與鏈霉親和素-熒光素、鏈霉親和素-HRP等探針結(jié)合，實現(xiàn)多重信號放大和多模態(tài)檢測。

結(jié)構(gòu)式：

二、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 免疫組化（IHC）

• 信號增強(qiáng)：通過HRP催化酪酰胺自由基生成，實現(xiàn)抗原位點的高密度標(biāo)記，結(jié)合鏈霉親和素-熒光素或酶探針，顯著提高低豐度蛋白檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。

• 低抗體濃度應(yīng)用：在無需較高靈敏度的場景中，可降低抗體或探針濃度，減少非特異性結(jié)合和交叉反應(yīng)。

2. 原位雜交（ISH）

• 基因表達(dá)分析：標(biāo)記靶核酸分子，實現(xiàn)基因表達(dá)的定量和定位分析，尤其適用于熒光檢測中克服組織自發(fā)熒光背景干擾。

3. 蛋白質(zhì)組學(xué)研究

• 高靈敏度標(biāo)記：結(jié)合TSA技術(shù)，對低豐度蛋白質(zhì)進(jìn)行高靈敏度檢測，為蛋白質(zhì)相互作用和表達(dá)譜分析提供工具。

4. 細(xì)胞表面蛋白標(biāo)記

• 膜不可滲透性：長鏈親水結(jié)構(gòu)使其無法進(jìn)入細(xì)胞，僅標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白，避免胞內(nèi)蛋白干擾，適用于細(xì)胞表面受體研究。

三、操作注意事項

1. 儲存條件

• 短期保存：4℃；長期保存：-20℃以下，避光、干燥，避免反復(fù)凍融。

2. 安全防護(hù)

• 操作時佩戴手套和防護(hù)眼鏡，避免長期吸入、皮膚接觸或攝入；在通風(fēng)良好環(huán)境中使用。

3. 溶液配制

• 水溶液或含過氧化氫體系中酚基易氧化，需新鮮配制或避光操作，確保反應(yīng)效率和標(biāo)記特異性。

4. pH控制

• 使用pH 7–9的緩沖液，避免pH影響靶分子結(jié)構(gòu)或試劑穩(wěn)定性。

5. 多重標(biāo)記兼容性

• 可與熒光標(biāo)記試劑、酶標(biāo)記試劑等聯(lián)合使用，實現(xiàn)多重標(biāo)記和檢測，需根據(jù)實驗需求優(yōu)化條件。

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