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cas:72040-63-2,Biotin-LC-NHS,生物素-X,琥珀酰亞胺酯的概述

2025-10-28 [84]

Biotin-LC-NHS 是一種廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域的生物素化試劑,其核心功能是將生物素分子共價(jià)連接到含氨基(-NH?)的生物分子上,如蛋白質(zhì)、抗體和核酸等。

化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成

Biotin-LC-NHS 的核心結(jié)構(gòu)由三部分組成:

  1. 生物素(Biotin):一種水溶性、非毒性維生素(維生素H或B7),具有與親和素(Streptavidin)或鏈霉親和素(Avidin)高親和力結(jié)合的特性,結(jié)合親和常數(shù)較高(Kd ~10?1? M),確保標(biāo)記分子與靶分子形成穩(wěn)定復(fù)合物。

  2. 長鏈間隔臂(LC, Long Chain):通常是一個(gè)由6-12個(gè)碳原子組成的柔性鏈狀結(jié)構(gòu),如6-氨基己酸長鏈。其作用是增加生物素與目標(biāo)分子之間的距離,減少空間位阻,提高標(biāo)記效率,同時(shí)保持標(biāo)記分子的生物活性。

  3. 活性N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS):分子末端的NHS酯能與蛋白質(zhì)或多肽中的自由氨基(如賴氨酸殘基)進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián),形成穩(wěn)定的酰胺鍵。NHS酯在水溶液中水解速率可控,需在pH 7–9的緩沖液中操作以確保反應(yīng)效率。

物理與化學(xué)性質(zhì)

  • 外觀:通常為白色至淺黃色固體。

  • 溶解性:易溶于有機(jī)溶劑如二甲基亞砜(DMSO)、乙腈或二氯甲烷,同時(shí)在水相中緩慢水解。

  • 穩(wěn)定性:在干燥、有機(jī)溶劑或低溫條件下相對(duì)穩(wěn)定,可長期儲(chǔ)存。但在水溶液中易水解,需在使用前新鮮配制或在有機(jī)溶劑中保存。

功能與應(yīng)用

  1. 蛋白質(zhì)標(biāo)記

    • 用于標(biāo)記抗體、酶等蛋白質(zhì),便于后續(xù)的檢測(cè)或純化。

    • 標(biāo)記后的蛋白仍保持結(jié)構(gòu)完整性和生物活性,廣泛用于免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中抗體或蛋白質(zhì)的高效標(biāo)記,如ELISA、Western blot、免疫沉淀等。

  2. 核酸標(biāo)記

    • 標(biāo)記DNA或RNA,用于雜交實(shí)驗(yàn)或測(cè)序。

  3. 細(xì)胞表面標(biāo)記

    • 標(biāo)記細(xì)胞表面的蛋白質(zhì),研究細(xì)胞間相互作用。

  4. 分子捕獲與純化

    • 通過親和素磁珠或親和層析,實(shí)現(xiàn)蛋白或核酸分子的高效捕獲和純化。

  5. 生物傳感器和芯片技術(shù)

    • 在生物傳感器和蛋白質(zhì)芯片中,用于穩(wěn)定固定蛋白或配體,實(shí)現(xiàn)高靈敏檢測(cè)。

  6. 藥物遞送與靶向研究

    • 用于構(gòu)建生物素-親和素系統(tǒng)的藥物遞送平臺(tái),實(shí)現(xiàn)靶向治療或分子追蹤。

使用注意事項(xiàng)

  • 儲(chǔ)存條件:建議儲(chǔ)存于-20°C的干燥環(huán)境中,避光避濕,以保持試劑的穩(wěn)定性和活性。

  • 溶解試劑:將Biotin-LC-NHS溶解在無水DMSO或DMF中,確保全溶解。

  • 反應(yīng)條件:將溶解后的試劑與目標(biāo)分子(如蛋白質(zhì)或核酸)在pH 7-9的緩沖液中混合,室溫或4℃反應(yīng)1-2小時(shí)。

  • 純化:通過透析、凝膠過濾或親和層析去除未反應(yīng)的試劑。

  • 安全警示:僅用于科研,不能用于人體。

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