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鏈霉親和素(SA)修飾金納米顆粒150nm的技術(shù)

2025-08-13 [280]

以下是關(guān)于鏈霉親和素(SA)修飾150nm金納米顆粒的詳細(xì)說明,涵蓋制備、特性及應(yīng)用:


1. 基本特性

  • 金納米顆粒(AuNPs)核心

    • 尺寸:150nm(可通過動(dòng)態(tài)光散射DLS或透射電鏡TEM驗(yàn)證)。

    • 表面等離子共振(SPR):在可見光區(qū)(約520-600nm)有強(qiáng)吸收,可用于比色檢測(cè)。

    • 穩(wěn)定性:需表面修飾(如SA)防止聚集,SA提供負(fù)電荷增強(qiáng)膠體穩(wěn)定性。

  • 鏈霉親和素(SA)修飾

    • 結(jié)合位點(diǎn):每個(gè)SA可結(jié)合4個(gè)生物素分子,實(shí)現(xiàn)高密度生物分子偶聯(lián)。

    • 偶聯(lián)方式:通常通過靜電吸附或共價(jià)連接(如羧基-氨基交聯(lián))將SA固定在AuNPs表面。


2. 制備方法

步驟示例

  1. AuNPs合成

    • 檸檬酸鈉還原法(適用于小尺寸):需調(diào)整方法(如種子生長(zhǎng)法)制備150nm AuNPs。

    • 表征:UV-Vis光譜(SPR峰紅移)、TEM(確認(rèn)單分散性)。

  2. SA修飾

    • 活化AuNPs:用帶羧基的 linker(如11-巰基十一烷酸,MUA)修飾AuNPs,EDC/NHS活化羧基。

    • SA偶聯(lián):將SA與活化后的AuNPs孵育(pH 7.4 PBS緩沖液,室溫2小時(shí))。

    • 封閉:加入BSA或乙醇胺封閉未結(jié)合位點(diǎn)。

  3. 純化

    • 離心(如10,000rpm, 15分鐘)去除游離SA,重懸于緩沖液(如含0.1% BSA的PBS)。


3. 關(guān)鍵質(zhì)量控制

  • 結(jié)合效率

    • BCA法:測(cè)定上清液中未結(jié)合的SA濃度。

    • SDS-PAGE:驗(yàn)證SA是否成功偶聯(lián)。

  • 功能性測(cè)試

    • 加入生物素化熒光分子(如FITC-生物素),通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)信號(hào)。


4. 應(yīng)用方向

  • 免疫檢測(cè)

    • 側(cè)向?qū)游?/span>:作為信號(hào)放大標(biāo)簽,檢測(cè)生物素化抗體(如新冠病毒抗原檢測(cè))。

    • ELISA替代:SA-AuNPs增強(qiáng)比色信號(hào),提升靈敏度。

  • 分子診斷

    • DNA檢測(cè):結(jié)合生物素化探針,用于核酸雜交(如SARS-CoV-2 RNA檢測(cè))。

  • 細(xì)胞標(biāo)記

    • 靶向標(biāo)記細(xì)胞表面生物素化受體。

  • 藥物遞送

    • 裝載生物素化藥物,實(shí)現(xiàn)靶向釋放(需優(yōu)化尺寸以穿透血管屏障)。


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