檢測(cè)原理

JC-1的工作原理基于其在不同線粒體膜電位狀態(tài)下的熒光特性變化。在高線粒體膜電位的情況下，JC-1以聚合物的形式存在，發(fā)出紅色熒光；而在低線粒體膜電位的情況下，JC-1以單體的形式存在，發(fā)出綠色熒光。通過(guò)監(jiān)測(cè)紅綠熒光的比例變化，可以評(píng)估線粒體的狀態(tài)，從而判斷細(xì)胞的健康程度或是否處于凋亡過(guò)程中。

結(jié)構(gòu)式：

概述

JC-1是一種常用的熒光探針，用于測(cè)量線粒體膜電位。它能夠選擇性地進(jìn)入線粒體，并且隨著線粒體膜電位的增加，可以逆地將其顏色從綠色變?yōu)槌壬＿@種性質(zhì)使得JC-1成為研究細(xì)胞凋亡時(shí)的理想工具，因?yàn)榫€粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。

染色步驟

使用JC-1進(jìn)行線粒體膜電位檢測(cè)的步驟通常包括細(xì)胞準(zhǔn)備、 JC-1染色、洗滌和熒光檢測(cè)等幾個(gè)環(huán)節(jié)。具體的步驟可能會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和設(shè)備的不同而有所差異，但基本流程通常是：

細(xì)胞準(zhǔn)備：將細(xì)胞鋪板在多孔培養(yǎng)板上，然后在適宜的條件下培養(yǎng)過(guò)夜。

JC-1染色：取一定體積的細(xì)胞懸液，加入 JC-1工作液，在適宜的溫度和二氧化碳環(huán)境下孵育一段時(shí)間。

洗滌：離心細(xì)胞懸液，去除上清，然后用緩沖液洗滌以去除未結(jié)合的染料。

熒光檢測(cè)：用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀分析經(jīng)JC-1染色后的細(xì)胞，通過(guò)觀察紅綠熒光的比例變化來(lái)判斷線粒體膜電位的狀態(tài)。

注意事項(xiàng)

JC-1必須在超純水充分溶解混勻后才能加入到JC-1染色緩沖液中，否則會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。

PH的變化會(huì)影響膜電位，因此在染色過(guò)程中需要保持染液中pH的一致性。

JC-1不易溶于水并有大量沉淀產(chǎn)生，因此在操作時(shí)需要特別注意。

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